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; 4.2.1 实验材料 ...............................39
        4.2.2 试剂 ...............................39
        4.2.3 仪器设备 ...............................39-40
    4.3 试验方法 ...............................40-41
    4.4 试验结果与分析............................... 41-50
    4.5 小结 ...............................50-51
第5章 结论与展望............................... 51-53
    5.1 结论............................... 51-52
    5.2 研究的创新点............................... 52
5.3 建议 ...............................52-53

结论

研究了透性化和固定化处理后，对L. helveticus L7产9c,ll〖-CLA的影响。通过对透性化试剂和透性化条件的比较，应用响应面法对透性化细胞的固定化条件进行了优化，对固定化和透性化细胞的转化能力，特点及稳定性进行了考察。较大地提高了菌体转化产9c,11/-CLA的能力和菌体的利用率。通过电镜观察，固定化胶珠内部具有丰富的通道，可以在固定菌体的同时，不影响底物和产物的运输。这些结果为9c,llr-CLA生产工艺优化提供了一定的理论依据和技术支持。主要结论如下：
建立了紫外光谱扫描和高效液相色谱联合检测共轭亚油酸的方法，用于反应液中9c，llr-CLA的定量和定性分析，也可用于微生物转化过程中9c,ll/-CLA产量的实时监测。
对细菌发酵生产CLA的条件进行了优化。以发酵液中9c,lI/-CLA含量为评价指标，先后进行了不同发酵时间（4、8、12、16、20、24、28、32、36、40 h)、不同 LA 浓度（0.125、0.25、0.5、1、1.5 mg/mL)、不同菌体浓度(1、2、4、6、8倍）的单因素试验。结果表明，当LA浓度为1 mg/mL，发酵液的发酵时间为36 h，9c,m-CLA的产量达到最高的产量水平；使用PBS洗涤菌体反应12 h，菌体浓度为2倍发酵液浓度时，9c，llr-CLA的产量达到最高的产量水平，L. helveticus L7发酵的最适菌体浓度为5><10ll)CFU/mL左右。
以9c,llr-CLA的产量为指标，分别以不同浓度的甲苯（1%、3%、5%、7%、9%)乙醇（10%、20%、30%、40%、50%) CTAB (0.5%、1.0%、1.5%、2.0%、2.5%)进行透性化处理，结果表明：乙醇、CTAB处理的效率均较高。先后使用体积分数为20%的乙醇，体积分数为1%的乙醚，体积分数为5%的甲苯，质量浓度为1 %CTAB对细胞进行透性化处理，结果表明，其中20 %乙醇透性化效果最突出，9c，lk-CLA产量可以达到最高值468明/mL。经溶菌酶处理得到的透性化Z. helveticus L7产9c,llZ-CLA活性较高，转化率达554pg/mL。超声波破碎法制备粗酶液亚油酸异构酶粗酶液的活性和稳定性均较差，

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